動態(tài)濁度法鱟試劑是通過檢測反應混合物的濁度到達某一預先設(shè)定的吸光度所需要的反應時間，或是檢測濁度增加速度來檢測內(nèi)毒素的方法。在適宜的條件下（溫度，pH值及無干擾物質(zhì)），細菌內(nèi)毒素激活C因子，引起一系列酶促反應，使鱟試劑產(chǎn)生凝集反應形成凝膠。隨著凝膠的形成，反應液的吸光度(OD值，濁度)增加，OD值增加的速度與內(nèi)毒素濃度成正相關(guān)。換言之，OD值上升某一預設(shè)限值(啟動OD)所需要的時間(定義為啟動時間)與內(nèi)毒素濃度成負相關(guān)，啟動時間的對數(shù)與內(nèi)毒素濃度的對數(shù)成線性關(guān)系，據(jù)此，可以定量供試品的內(nèi)毒素濃度。

　　
 

　　動態(tài)濁度法鱟試劑操作方法如下：

　　

　　1、動態(tài)光度測定儀器的設(shè)定：

　　

　　預熱儀器，設(shè)置溫育溫度為37℃，設(shè)置模板及程序。設(shè)定讀板波長為340nm、630nm，設(shè)定動力學參數(shù)：讀板90-120分鐘，每讀板間隔30-150s。

　　

　　2、內(nèi)毒素標準溶液配制

　　

　?。?）標準曲線所采用的內(nèi)毒素濃度可以為2至10倍稀釋的系列(如0.5，0.25，0.125，0.0625EU/mL或10，1，0.1，0.01EU/mL))。

　　

　?。?）取內(nèi)毒素工作標準品1支，用砂輪沿安瓿頸部劃痕，開啟，加入適量（建議在0.5mL-1.2mL之間）細菌內(nèi)毒素檢查用水，置旋渦混合器上劇烈振搖5分鐘。

　　

　?。?）將上述內(nèi)毒素溶液進一步用細菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成所需濃度，每稀釋一步均應在旋渦混合器上劇烈振搖1分鐘。稀釋的內(nèi)毒素溶液靜置時間超過10分鐘，用前在旋渦混合器上劇烈振搖1分鐘，配置時間超過4小時的內(nèi)毒素溶液應丟棄。

　　

　　3、陰性對照為細菌內(nèi)毒素檢查用水。

　　

　　4、動態(tài)濁度法鱟試劑的溶解：按標示量加細菌內(nèi)毒素檢查用水于鱟試劑中，輕輕振搖使鱟試劑*溶解。注意不要用旋渦混合器劇烈振搖。溶解的鱟試劑應在10分鐘內(nèi)使用。若采用多道移液器，將溶解的鱟試劑轉(zhuǎn)移到除熱原加樣槽，并輕輕搖勻。

　　

　　5、實驗操作：

　　

　?。?）取除熱原微板，在各孔中分別加入100μL細菌內(nèi)毒素檢查用水、內(nèi)毒素標準溶液，或供試品。

　　

　?。?）將微板放置于鱟試儀中，37℃溫育10分鐘。

　　

　?。?）溫育結(jié)束，用移液器或多道移液器加入100μL鱟試劑（避免產(chǎn)生氣泡!)，中速振搖10秒混勻，在340nm波長處，每30秒（到60秒）讀一次，讀板120分鐘。