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除去血中干擾物質(zhì)的前處理方法

發(fā)布時間: 2022-12-05  點擊次數(shù): 886次

一般來說由于血液的組成比較復(fù)雜,其中的許多物質(zhì)尤其是高等動物的血漿或血清對TALLAL試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)很強(qiáng)的干擾作用。因此當(dāng)我們對這類樣品的內(nèi)毒素進(jìn)行測定時,必須將其中的干擾物質(zhì)除去后,方可進(jìn)行檢測。

 

目前作為血漿中的干擾物質(zhì)主要有各種蛋白酶抑制劑、內(nèi)毒素結(jié)合蛋白以及纖溶酶原抑制劑等物質(zhì),對于比色法由于Xa因子能分解 Boc-LEU-Gly-Arg-PNA 肽鏈。因此在測定前排除這些干擾物是十分必要的。

除去血中干擾物質(zhì)的前處理方法主要有以下幾種,現(xiàn)分別介紹如下

 

1稀釋加熱法血漿用溶解水進(jìn)行3~10倍稀釋,然后在37 ~ 100℃水中進(jìn)行加熱處理。保溫時間一般在5~10分鐘;

2氯仿提取法血漿加等量的氯仿振動3小時,然后取上層進(jìn)行檢測;

3)乙-醚處理法血漿加入乙-醚處理并在40℃保溫將乙-醚去除

4三氟代乙酸法血漿中加入乙酸調(diào)節(jié)pH4.0后用K2HPO4調(diào)節(jié)pH7~7.5

5表面活性劑處理法同稀釋加熱法一樣只是將稀釋用水改為表面活性劑;

6凝膠過濾法;

7堿性處理法血漿用0.2NNaOH37℃保溫10分鐘后用HCl中和;

8高氯酸法PCA或新高氯酸法New PCA);

9Beads將吸附內(nèi)毒素的特殊樹脂放入血漿中,取出后,加入LAL試劑進(jìn)行反應(yīng)。

 

 

在這些方法中,常用的主要有氯仿提取法、稀釋加熱法以及高氯酸PCA法和新高氯酸New PCA,其中前兩種方法由于內(nèi)毒素回收率﹑假陽性等問題的存在,因此在測定時需要探討,PCANew PCA,由于添加內(nèi)毒素的回收率好,目前在日本主要用于臨床前處理。

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